細(xì)胞培養(yǎng)中的無菌技術(shù)

無菌技術(shù)事細(xì)胞培養(yǎng)中，十分重要的一個(gè)環(huán)節(jié)。保持實(shí)驗(yàn)無菌性、防止污染對(duì)于保證細(xì)胞狀態(tài)、維持實(shí)驗(yàn)結(jié)果的完整性和穩(wěn)定性而言，都有著重要意義。污染會(huì)嚴(yán)重影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，危及整個(gè)實(shí)驗(yàn)的完整性。

什么是無菌技術(shù)

細(xì)胞實(shí)驗(yàn)過程中的污染，來源廣泛，包括空氣污染物、被污染的介質(zhì)或試劑等。不正確的實(shí)驗(yàn)操作也會(huì)導(dǎo)致污染。因此，在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，每個(gè)實(shí)驗(yàn)步驟中的“無菌技術(shù)"，就變得很有意義。

無菌技術(shù)是一套防止微生物（包括細(xì)菌、病毒、真菌、支原體等）污染生物樣品或培養(yǎng)物的操作方法。這些技術(shù)一定程度上保證實(shí)驗(yàn)不受有害微生物的影響，以提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的質(zhì)量。

無菌技術(shù)有哪些?

1、設(shè)備的清潔與滅菌

在開始任何細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)之前，必須對(duì)所有設(shè)備、耗材和試劑進(jìn)行滅菌處理，當(dāng)然，我們推薦實(shí)驗(yàn)人員盡量選擇商品化的無菌試劑。

滅菌方法包括高壓滅菌、過濾、紫外線照射、乙醇噴灑或擦拭、消毒清潔試劑噴灑或擦拭等。

2、環(huán)境的清潔與滅菌

所有細(xì)胞培養(yǎng)工作應(yīng)在無菌和清潔的環(huán)境中進(jìn)行。因此要對(duì)實(shí)驗(yàn)環(huán)境進(jìn)行清潔與滅菌。

包括實(shí)驗(yàn)前對(duì)實(shí)驗(yàn)空間定期清潔，包括桌面、地面、墻面、生物安全柜操作臺(tái)等，開始實(shí)驗(yàn)前，還應(yīng)打開生物安全柜中的紫外線燈進(jìn)行照射滅菌。

除了常規(guī)的消毒試劑，這里推薦使用德國Minerva Biolabs的Mycoplasma-off支原體祛除噴霧劑，不僅對(duì)支原體起作用，還能高效清除并預(yù)防細(xì)菌、真菌等污染物。

3、正確處理實(shí)驗(yàn)材料

正確處理實(shí)驗(yàn)材料，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)符合相關(guān)規(guī)定、避免交叉污染。包括佩戴適當(dāng)?shù)膫€(gè)人防護(hù)設(shè)備，如手套、口罩；及時(shí)更換移液器一次性器具等操作。

4、實(shí)驗(yàn)室合理布局

在實(shí)驗(yàn)過程中，嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)室中物品擺放準(zhǔn)則，以培養(yǎng)箱舉例：培養(yǎng)皿擺放密度應(yīng)合理，宜少不宜多等。

5、定期監(jiān)測培養(yǎng)物

定期監(jiān)測培養(yǎng)物，對(duì)于及早發(fā)現(xiàn)和解決而言，也是一個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)。這包括在顯微鏡下檢查培養(yǎng)物狀態(tài)、肉眼觀察培養(yǎng)基的形態(tài)、顏色等變化等。必要時(shí)可以使用PCR技術(shù)定期測試微生物污染的存在。

德國Minerva Biolabs Venor® Gem Classic支原體檢測試劑盒，用于常規(guī)實(shí)驗(yàn)中支原體的檢測；如果需要進(jìn)行項(xiàng)目申報(bào)等流程，需要嚴(yán)格的方法學(xué)驗(yàn)證，可以使用德國Minerva Biolabs Venor® Gem qEP，支原體qPCR檢測試劑盒，通過《歐洲藥典》和《日本藥典》的方法學(xué)驗(yàn)證，方便快捷、準(zhǔn)確率高。

總結(jié)

總之，在細(xì)胞培養(yǎng)過程中保持無菌條件是保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確可靠的必要條件。遵循適無菌技術(shù)，定期監(jiān)測培養(yǎng)，并采取必要的預(yù)防措施來防止污染，可以顯著降低細(xì)胞培養(yǎng)中生物污染的風(fēng)險(xiǎn)。