適用范圍:
不易獲得的生物樣本,被支原體污染了,但需要挽救,不能丟棄, 例如:不容易獲得的細胞種子。可采用支原體清除法。若是無法長期培養(yǎng)的珍貴樣本或病毒收獲液,則推薦使用德國MB公司的Mynox® ,處理3小時,直接殺除。Mynox 僅供研究使用。不適用于臨床治療。
使用方法:
1. 貼壁細胞系的處理
1.1細胞和除菌混合物的制備
1.1.1使用無菌的6厘米培養(yǎng)皿配制消菌液。
1.1.2加入2.8 ml含5% (v/v) FBS的標準細胞培養(yǎng)基。
1.1.3加入200µl Mynox®(1瓶)。
1.1.4在含有5% (v/v)FBS的細胞培養(yǎng)基中加入2ml新鮮胰蛋白酶化的10^4 – 10^5細胞。包括細胞在內(nèi)的處理液的總體積為5ml。注意:確保只處理單個細胞(在顯微鏡下檢查!)如有必要,增加胰蛋白酶處理的持續(xù)時間或通過上下移液機械分解細胞團塊。注意:先加入Mynox®,然后將細胞放入培養(yǎng)基中。將細胞直接加入除菌混合物培養(yǎng)基中(將吸管頭直接插入溶液中).
1.2 Mynox®的處理細胞
1.2.1在正常生長條件下,將細胞與除菌混合物保持一整個傳代周期(約6至8天)。然后,除去含有Mynox®的培養(yǎng)基,將細胞在標準培養(yǎng)基中傳代。
1.2.2.注意:如果細胞在8天后仍未達到融合,請停止處理,丟棄含有Mynox®的培養(yǎng)基,并添加新鮮的標準細胞培養(yǎng)基。注意:在處理過程中,應(yīng)經(jīng)常觀察細胞,檢查細胞毒性作用,如果明顯注意到,應(yīng)立即停止治療,更換培養(yǎng)基或用培養(yǎng)基1:5稀釋混合物。
2. 懸浮細胞系的處理
2.1細胞和除菌混合物的制備
2.1.1使用無菌離心管配制除菌混合物。
2.1.2加入1.6 ml 0.125%胰蛋白酶和5 mM EDTA。
2.1.3加入200µl Mynox®(1瓶)。
2.1.4將1.6 ml含有10% (v/v) FCS和10^4 – 10^5細胞的標準細胞培養(yǎng)基從懸浮細胞培養(yǎng)液中轉(zhuǎn)移到除菌混合物中。漩渦。包括細胞在內(nèi)的處理液的總體積為3.4 ml。注意:確保只處理單個細胞(在顯微鏡下檢查!)注意:首先加入Mynox®,然后將細胞放入培養(yǎng)基中。將細胞直接加入溶液中(將吸管頭直接插入消泡液中!)注意:在旋轉(zhuǎn)過程中,請確溶液濕潤離心機管的整個內(nèi)表面。
2.2 Mynox®的處理和去除
2.2.1 37℃孵育30分鐘。
2.2.2將細胞輕離心(600 × g) 5分鐘,丟棄上清。
2.2.3將細胞重懸于不含Mynox®的標準細胞培養(yǎng)基中,置于培養(yǎng)瓶中。為了獲得更有效的方法,可以在Mynox®存在下進行1代傳代培養(yǎng):
(1)將細胞重懸在含有5% (v/v) FBS和150µl Mynox®的5ml細胞培養(yǎng)基中。
(2)在正常生長條件下,將細胞在此培養(yǎng)基中培養(yǎng)3天。
(3)將細胞在無Mynox®生長培養(yǎng)基中傳代。
(4)注意:在治療過程中,應(yīng)經(jīng)常觀察細胞,檢查細胞毒性作用,如果明顯注意到,應(yīng)立即停止反應(yīng),更換培養(yǎng)基或用培養(yǎng)基1:5稀釋混合物。
產(chǎn)品優(yōu)勢:
Mynox® 是一種支原體去除劑,不含抗生素的制劑,通過誘導微生物死亡來消除支原體污染。它的活性基于生物物理機制,因此幾乎不會產(chǎn)生抗性菌株。
1.快速、有效。針對無法長期培養(yǎng)的珍貴樣本,使用Mynox®處理細胞3小時左右,即可祛除支原體。
2.不含抗生素,不會誘導支原體耐藥。